引誘排放配子

車渠貝排放配子有日及月的模式(dial & lunar pattern)(有規律性)。日週期顯示出排放配子的活動在每天下午的中間到後半段達到最高潮;月週期則是滿月及新月時期。要引誘車渠貝排放配子,則可以選擇這些時段來誘導,以配合自然生殖循環(滿月及新月的下午4~6點最適)。

車渠貝的生殖狀況可藉由觀察從生殖腺取出的卵來判定;以插入注射針來抽取,利用組織切片觀察的方法。但是組織切片比較不安全,容易傷害到貝體;因此可利用觀察臟器顏色來判斷,但此法比較不準確。透過出水孔,可看到生殖腺周圍臟器呈不鮮明的棕色至鮮明的橙色。通常看到深色的橘色時,代表已準備放出精卵了。藉由內臟顏色及日月週期,一般來說就能準確的控制排放結果。

準備繁殖用的種貝先蓄養在乾淨有流水的缸子中。目前有三種已確定的方法來刺激車渠貝的排卵:熱刺激、生殖腺萃取物及血清素(serotonin)

熱刺激

迅速的改變車渠貝內部溫度能刺激其排卵:藉由關掉缸子的水流,降低水位及利用陽光來加熱海水達到約34℃。另一個替代性方法則是將種貝移出缸中,側面接受陽光曝曬1-2小時。接著在開啟缸中水流或將種貝再度移入池子中靜置30-60分鐘恢復。這種加熱再恢復的程序在一天中重覆3-4次。

在早上接受熱刺激的種貝,通常在下午接近晚間時就會排卵。有些繁殖者喜好用低程度的熱刺激方法,在一整天的時間裡,僅改變1-2℃的溫度。熱刺激的方法是極度花費時間的流程,但是也是對生物體傷害較小的方法,且不需任何化學藥物的刺激。然而,需要花上很長的時間來誘導;有的繁殖者喜好更確定,化學性誘導排配子的方法。熱刺激只是用來輔助其他引誘方法,來增加排卵的可能性。

生殖腺萃取液

車渠貝是集體排放配子形的生物,會受到水體中已排放配子而誘導排放。繁殖者能利用這特性,藉由加入成熟種貝生殖腺的萃取液,來誘導種貝排放精卵。

先從幾個成熟的種貝中取出生殖腺(當然,這幾個種貝將會犧牲掉),放到攪拌器中,浸泡在用1μm過濾過的海水裡,接著再以200μm濾網過濾去除掉較大的顆粒,即得到生殖腺萃取液。降低繁殖缸中的水位,水面約距種貝套膜上2-4cm,關掉水流。接著再將萃取液直接加入水中,或是利用注射筒在種貝接近進水孔處注射約5ml的萃取液。排放精卵的行為約在加入生殖腺萃取液後的一小時內發生。

剩餘的生殖腺或萃取液能冷凍起來,下次再利用;避免不必要的犧牲種貝。包含種貝配子的海水也有類似生殖線萃取液的效果,也可冷凍起來下次備用。從一種車渠貝所得的生殖腺萃取液也可用在不同種的車渠貝上,但效果會有不同的變化。

血清素

血清素(5-hydroxytryptamine creatinine sulphate complex)是一種神經傳導物質,來自任何一種車渠貝中的生殖腺物質。如果生殖腺還未適合排卵時 ,卵在最適合前的時期排出,卵質跟幼苗的生存能力將會降低。生殖腺狀況可以藉由日月週期來預測。

以20μM(15.7mg配上20ml的海水)濃度的血清素,以150μm口徑的注射針直接注入種貝的生殖腺。注射量視種貝大小而定,一般來說,大型種貝(H.spp.,T. gigas ,T. derasa, T. squamos )約使用2ml,而小型種貝
T. maxima & T. crocea)使用1ml。血清素注射至成熟的生物體中,約5-10分鐘就會刺激排精。注射血清素會造成種貝的死亡,沒經驗的技術人員容易去刺穿車渠貝的心臟或臟器。

配子的釋放及收集

卵及精子的收集

在誘導排卵前,先準備10個乾淨的收集桶放置在繁殖缸附近,預備收集卵及精子。在誘導排卵後,種貝置放在繁殖缸並且緊密的觀察是否有排卵的跡象。初期排放的跡象為殼的張開與收縮現象;接著就是精子的排放,卵的釋放則在精子釋放之後。卵及精子的釋放時,種貝通常會有一連串的收縮作用,每一次的收縮即代表配子又大量的釋放。接下來,每次收縮所釋放的配子會越來越少,直到種貝完全部排放耗盡。

一旦一個個體似乎要排放大量的精子時,就要將其移出繁殖缸,放到收集桶內。為了保證受精率及基因多樣性,精子至少要從三個種貝個體以上收集,每個個體要放置在隔開的放集筒內。在車渠貝中,如果要作人工授精,不需要太大量的精子。每個種貝僅需要一或兩次強烈的收縮,釋放精子即足夠。收集桶內應放滿海水,置放在陰涼處,避免溫度的上升使得種貝與配子受到溫差震蕩。

當精子釋放量開始減少,需要密集的觀察種貝是否要開始放卵,此時會有些粒狀物出現在精子間。在一連串收縮後,精子釋放量變少,甚至停止,接著卵的釋放量增加。當種貝僅僅只有排卵時,將其移至一乾淨的收集桶內。每個種貝要放置在分隔的收集桶內,卵的釋放要持續到排完為止。當大量繁殖時,建議要標識出每一個種貝個體,方便辨別。

人工受精

受精動作主要是將精卵混合;精子在排放一小時內都有活動力,但是卵子存活時間較短。因此,精子要在卵子釋放後15分鐘內加入。如果收集到的精子來自超過一個個體,則卵的受精能夠使用來自全部個體的精子。但要注意不要造成自體受精,一般來說,自體受精會造成低的受精率及存活率。

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